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시험법

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정도관리의 기본원칙

  1. 정도관리는 실험이 올바로 이루어졌는지를 확인할 수 있는 가장 기본적인 방법
  2. 정도관리는 모든 실험에서 필요 (항생제 감수성 시험, PCR 등)
  3. 실험에 필요한 구성 요소 중 변경이 있으면 정도관리로 확인 (시약 회사 변경, lot 번호 변경 등)
  4. 정도관리 결과가 예상되는 결과와 다를 경우는 즉시 보고
    • * 정도관리 결과 보관 - 모든 정도관리결과는 기록하여 장기 보존한다 (최소 2년 이상)
  5. 항생제 감수성 시험이 완료되면 균주의 특성에 따라 내성유전자 확인 시험을 시행한다.
  6. 접종한 배지는 37 °C, ambient air 상태로 종류에 따라 정해진 시간 동안 배양한다.
  7. 내성유전자 확인 시험이 종료된 균주의 자료는 임상 자료와 통합하여 지정된 데이터 형식으로 정리하며, 원 균주는 skim milk와 microbank에 장기 보관을 시행한다.

Mueller-Hinton 한천 배지 정도관리

가. 시행 시기: 새로운 MHT 배지 입고 시

나. 시행 방법

  1. 기본적인 시행 방법은 일반 세균의 디스크 확산법과 동일하며 정도관리 균주를 일반 시험균주처럼 시험한다.
  2. 정도관리 균주: E. coli ATCC 25922, P. aeruginosa ATCC 27853, S.aureus ATCC 25923
  3. 억제대 지름이 해당 범위에 들지 않으면 실험실 내 운영체계에 따라 보고한다.

디스크 확산법의 정도관리

가. 시행 시기

  1. 항생제 디스크 또는 Etest 스트립이 새로 입고되는 경우
  2. Muller-Hinton 한천 배지가 새로 입고되는 경우
  3. 1주일마다 시행 (시험일이 1주일보다 긴 경우는 매 시험일마다 시행)
    • 가) 항생제 감수성 시험을 1주일마다 정도관리하기 위해서는 다음의 조건을 만족해야 한다.
    • 나) 정도관리 대상인 표준 균주와 항생제를 사용하여 3회/일 X 5일간 감수성 시험 시행한다.
    • 다) 15회 중 1회 이하로 오류가 발생한 경우에는 주간 정도관리로 전환하며, 15회 중 2-3회의 오류가 발생한 경우 추가로 3회/일 X 5일간 감수성 시험을 시행한다.
    • 라) 30회의 시험 중에서 3번 이하의 오류가 발생한 경우 주간 정도관리로 전환한다.
    • 마) 처음 15회에서 4회 이상의 오류가 발생하였거나, 추가 시험을 포함한 30회에서 4회 이상의 오류가 발생한 경우는 감수성 시험 방법에 문제가 있는 것으로 판단하고 전체 과정 점검 및 오류 교정을 시행한다.
      항생제 감수성 시험 정도관리 상세내용 아래참조

      항생제 감수성 시험 정도관리

      • Test 3 replicates of each QC strain for 5 days using individually prepared inoculum
      • 1. 0-1 of 15 out of range?
      • 1.1 Pass, Convert to weekly QC.
      • 2. 2-3 of 15 out of range?
      • 2.1 Test another 3 replicates for 5 days.
      • 2.1.1 2-3 of 30 out of range?
      • 2.1.1.1 Pass. Convert to weekly QC.
      • 2.1.2 ≥4 of 30 out of range?
      • 2.1.2.1 Fail, 3.1로 이동
      • 3. ≥4 of 15 out of range?
      • 3.1 Fail, Continue to include QC each test day. Take corrective action.
      • 3.1.1 처음으로 돌아가서 다시 테스트 반복
      | Figure Ⅵ-1 | 항생제 감수성 시험 정도관리

나. 시행 방법

  1. 기본적인 시행 방법은 일반 세균의 디스크 확산법과 동일하며, 디스크 확산법 검사 시에 정도관리균주를 일반 시험균주처럼 포함시켜 시험한다.
  2. 정도관리 균주: 표 참조
  3. 억제대 지름이 해당 범위를 벗어나면 실험실 내 운영체계에 따라 보고한다.
    정도관리 대상의 분리 균종별 시험관리 균주의 정보 표
    분리 균종 시험관리 균주
    S. aureus S. aureusATCC25923 S. aureusATCC29213
    E. faecalis S. aureusATCC25923 S. aureusATCC29213
    E. faecium S. aureusATCC25923 S. aureusATCC29213
    Enterobacteriaceae E. coli ATCC25922 P. aeruginosa ATCC27853 E. coliATCC35218
    P. aeruginosa P. aeruginosaATCC27853 E. coliATCC35218
    A. baumannii E. coliATCC25922 P. aeruginosaATCC27853 E. coliATCC35218
    Salmonellaspp. E. coliATCC25923 P. aeruginosaATCC27854 E. coliATCC35219
    Shigellaspp. E. coliATCC25924 P. aeruginosaATCC27855 E. coliATCC35220
    Campylobacterspp. S. aureusATCC25923

한천 희석법의 정도관리

가. 시행 시기: 모든 시험

나. 시행 방법

  1. 한천 희석법 시험 균주에 정도관리 균주를 시험 균주처럼 포함시키고 한천 희석법 수행한다.
  2. 정도관리 균주: E. coli ATCC 25922, P. aeruginosa ATCC 27853
  3. MIC가 해당 범위에서 벗어나면 실험실 내 운영체계에 따라 보고한다.

액체배지 미량 희석법의 정도관리

가. 시행 시기: 모든 시험

나. 시행 방법

  1. 액체배지 미량희석법 시험 균주에 정도관리 균주를 시험 균주처럼 포함시키고 액체 배지 미량희석법 수행
  2. 정도관리 균주: E. coli ATCC 25922, P. aeruginosa ATCC 27853
  3. MIC가 해당 범위에서 벗어나면 실험실 내 운영체계에 따라 보고한다.

PCR/Real time PCR 정도관리

  1. 시행 시기 : 모든 실행 시기 (Every run)
  2. 시행 방법 : 양성 대조 및 음성 대조를 실험 검체처럼 포함시켜 검사 수행
  3. 양성 대조 : 해당 유전자 양성 균주 DNA
  4. 음성 대조 : 증류수
  5. 양성 대조가 음성이거나 음성 대조가 양성이면 실험실 내 운영체계에 따라 보고한다.
항생제 별 PCR/Real time PCR 정도관리를 위한 Method, Antibiotics, E. coli 균주, P.aeruginosa 균주, S.aureus 균주, E. faecalis 균주의 Range 정보 표
Method Antibiotics Range
E. coli 25922 P.aeruginosa 27853 S.aureus 25923 S.aureus 29213 E. faecalis 29212
디스크확산법 Amikacin 19-26 18-26 20-26
Ampicillin 15-22 27-35
Amoxicillin-clavulanic acid 18-24 28-36
Ampicillin-sulbactam 32-38 24-30
Aztreonam 28-36 23-29
Cefazolin 21-27 29-35
Cefepime 31-37 24-30 23-29
Cefotaxime 29-35 18-22 25-31
Cefoxitin 23-29 23-29
Ceftazidime 25-32 22-29 16-20
Chloramphenicol 21-27 19-26
Ciprofloxacin 30-40 25-33 22-30
Clindamycin 24-30
Colistin 11-17 11-17
Ertapenem 29-36 13-21 24-31
Erythromycin 22-30
Gentamicin 19-26 17-23 19-27
Gentamicin-HL 16-23
Imipenem 26-32 20-28
Meropenem 28-34 27-33 29-37
Minocycline 19-25 25-30
Mupirocin (200 μg) 29-38
Nalidixic acid 22-28
Nitrofurantoin 20-25 18-22
Oxacillin (1 μg) 18-24
Peniciilin 26-37
Piperacillin 24-30 25-33
Piperacillin-tazobactam 24-30 25-33 27-36
Quinupristin-dalfopristin 21-28
Rifampin 8-10 26-34
Streptomycin-HL 14-20
Trimethoprim-sulfamethoxazole 23-29 24-32
Tetracycline 18-25 24-30
Tigecycline (EUCAST) 20-27 9-13 20-25
Tobramycin 18-26 20-26 19-29
MIC Amikacin 0.5-4 1-4 64-256
Ampicillin 2-8 0.5-2 0.5-2
Azithromycin 0.5-2
Cefotaxime 0.03-0.12 8-32 1-4
Cefoxitin 2-8 1-4
Ceftriaxone 0.03-0.12 1-8
Ceftazidime 0.06-0.5 1-4 4-16
Chloramphenicol 2-8 2-16 4-16
Ciprofloxacin 0.004-0.016 0.25-1 0.12-0.5 0.25-2
Colisitn 0.25-2 0.5-4
Gentamicn 0.25-1 0.5-2 0.12-1 4-16
Imipenem 0.06-0.25 1-4 0.015-0.06 0.5-2
Linezolid 1-4 1-4
Meropenem 0.008-0.06 0.25-1 0.03-0.12 2-8
Nalidixic acid 1-4
Streptomycin NA
Teicoplanin 0.25-1 0.25-1
Tetracycline 0.5-2 8-32 0.12-1 8-32
Tigecycline 0.03-0.25 0.03-0.25 0.03-0.12
Trimethoprim-sulfamethoxazole ≤0.5/9.5 8/152-32/608 ≤0.5/9.5 ≤0.5/9.5
Vancomycin 0.5-2 1-4